科学家尝试使用Cre/loxP位点特异性重组系统,在检测目的基因导入成功后,删除转基因烟草细胞内的抗除草剂基因.其技术过程如下(图中的■代表基因前的启动子),据图回答:
(1)loxP是由34个碱基对构成的小型DNA片段,有两个13个碱基对反向重复序列和中间间隔的8个碱基对序列组成(如下图).对于这种已知序列的小型DNA,通常用___方法获取.
(2)loxP自身不会表达,插入质粒后也不影响原有基因的表达.Cre酶能特异性地识别此序列并在箭头处切开loxP上的磷酸二酯键,其功能类似于基因工程中的___酶.从遗传学角度分析,Cre酶改变质粒产生的结果相当于可遗传变异中的___.
(3)除图示外,重组质粒中通常还应具有___结构;重组质粒上抗除草剂基因的作用是___;将重组质粒导入到植物细胞中最常用的方法是___.
(4)经检测重组质粒转导成功后,抗除草剂基因已没有用途,继续留在植物体内可能会扩散转移造成安全问题.经Cre酶处理后,质粒中的两个loxP序列分别被切开后,可得到如上图右侧的这两个DNA分子.由于___的原因,抗除草剂基因不再表达,之后会在培养过程中消失.
(5)loxP序列是有方向性的.如果经Cre酶处理后,发现抗除草剂基因反向连接在质粒一上,则原来质粒一中这两个loxP序列的方向是___.
A.两个都是正向B.两个都是反向C.一个正向一个反向 D.与方向无关.
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